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說說洗滌在ELISA試劑盒過程中的作用
發布時間:2021-11-16   點擊次數:222次
  在進行酶聯免疫吸附劑測定(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)實驗中,有很多需要注意的地方,由于ELISA方法廣泛應用在各種抗原和抗體的此定中。但是測定中的影響因素很多,并且對操作有較高的要求,所以,在實驗中除了正常的相互反應,還會出現錯誤的反應,導致錯誤的結果。
  洗滌在ELISA試劑盒過程中雖不是一個反應步驟,但卻決定著實驗的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質,以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的,而在洗滌時應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來??梢哉f在ELISA操作中,洗滌是最主要的關鍵技術,應引起操作者的高度重視,操作者應嚴格按要求洗滌,不得馬虎。
  洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質的結合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團,也含親水基團,其疏水基團與蛋白質的疏水基團借疏水鍵結合,從而削弱蛋白質與固相載體的結合,并借助于親水基團和水分子的結合作用,使蛋白質回復到水溶液狀態,從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,其濃度可在0.05%-0.2%之間,高于0.2%時,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度。
  洗板時注意各種試劑盒的洗液不要混用。如果洗液需要稀釋,應按要求稀釋,所用的水電導率最好在1.5us/cm之下,洗液如果結晶應待其融解后配制。保證洗板浸泡時間為40秒左右,孔內液體被洗板機吸收得越干凈洗滌效果更好,手工洗板防止洗液在孔內形成氣泡。
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